金属蛋白酶组织抑制因子3敲低通过抑制活性氧簇启动的线粒体凋亡通路对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的研究

更新时间:2023-05-28

【摘要】目的探讨金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP3)在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡过程中的作用机制。方法细胞分为对照组(Con)、高糖组(HG)、22.0 mmol/L葡萄糖+活性氧簇(ROS)清除剂组(NAC)、22.0 mmol/L葡萄糖+caspase 8特异性抑制剂组(IETD)、22.0 mmol/L葡萄糖+caspase 9特异性抑制剂组(LEHD)和22.0 mmol/L葡萄糖+si-TIMP3组(si-TIMP3),各组培养48 h,噻唑蓝实验检测细胞存活率;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;DCHF-DA染色法检测细胞内ROS的生成水平;Caspase特异性抑制剂预处理以预估细胞凋亡途径,检测线粒体凋亡通路蛋白细胞色素c(Cyt c)和凋亡诱导因子(AIF)的蛋白表达;JC-1染色分析细胞膜电位的丢失情况。高糖刺激前予TIMP3敲低以观察其对上述事件的影响。结果高糖浓度依赖性促进TIMP3表达和细胞活力降低(P0.05),NAC、si-TIMP3组细胞活性升高,细胞凋亡降低,细胞质中Cyt c和AIF表达降低,线粒体膜电位升高(P<0.01)。结论 TIMP3敲低通过抑制ROS生成,进而抑制高糖诱导的线粒体凋亡通路,以对抗高糖诱导的HUVECs细胞损伤。

【关键词】 金属蛋白酶组织抑制因子3 人脐静脉内皮细胞 活性氧簇 线粒体凋亡途径

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